La prolactina hipofisiaria humana contiene 199 residuos de aminoácidos y tres puentes disulfuro; De los primeros 50 aminoácidos más del 80% son idénticos u homólogos a la prolactina bovina. Tiene un peso molecular aproximado 22,500 daltons y una similitud estructural considerable con la hormona del crecimiento (GH) humana y la somatomamotropina corionica humana (hCS). La vida media de la prolactina, al igual que la GH, es cercana a los 20 minutos. El endometrio y la placenta secretan prolactina con estructuras similares.
Su producción esta asociada a las celulas lactotropas de la adenohipófisis, las cuales ocupan entre el 30% y 40% del número de las células de la adenohipófisis.